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弗氏佐剂是研究中最常用的佐剂之一，将不可代谢的矿物油（石蜡油或二缩甘露醇一油酸）制备成油包水的乳剂后使用。如在佐剂中加入灭活的结核分枝杆菌则称为弗氏完全佐剂，不含结核分枝杆菌则称为弗氏不完全佐剂。弗氏佐剂由JulesFreund于二十世纪四十年代首次开发，目的是使抗原缓慢释放，刺激机体产生高效长期的免疫反应1,2,3。弗氏佐剂的主要缺点是可引起肉芽肿，导致接种部位的炎症和病变。弗氏完全佐剂中的分枝杆菌可吸引巨噬细胞和其他细胞到注射部位，因此增强免疫应答的能力比弗氏不完全佐剂更强。为减少副作用，弗氏完全佐剂一般用于初次免疫。弗氏不完全佐剂一般用于初次免疫后的加强免疫。

• 如果要使用弗氏完全佐剂，加入0.5mL的蒸馏水到分支杆菌中并涡旋振荡以重悬细菌。
  
• 37℃温浴使佐剂成为液体形式。
  
• 将抗原（最好是溶于盐水中）与等体积的佐剂混合以形成乳液。为形成乳液，需要剧烈及长时间的混合。配制乳液的方法至少有三种：
  
  • 小体积样品：可在离心管中制备乳液。先将佐剂吸入离心管，涡旋过程中加入等体积的抗原溶液。剧烈涡旋直至形成浓稠的乳液。
    
  • 中等体积样品：使用鲁尔接头连接的两个注射器制备乳液。通常需要使用三通阀。将适量的抗原溶液加入到一个玻璃注射器中，加入量不应超过注射器容积的一半。将等体积的佐剂加入到另一个玻璃注射器中。除去全部空气并将注射器通过鲁尔接头连接到三通阀上。调整三通阀，使两个注射器之间的连接处于打开状态。先小心压下抗原溶液的活塞，将抗原推入佐剂的油中；交替推动活塞，将佐剂和抗原溶液混合成乳剂，继续直到活塞难以推动。
    
  • 大量体积样品：使用组织匀浆机来制造乳液。首先将佐剂加入匀浆机中。短暂运行匀浆器，使佐剂包裹内部。再加入等体积的抗原溶液并运行机器直至形成浓稠的乳液。
• 所得到的乳液应该非常稠，测试时将乳液滴到盐水的表面上不会分散。
  
• 将乳液转移到注射器中（如果使用双注射器方法，则将注射器从鲁尔接头上取下）。清除所有空气，装上适当大小的针头，此时样品可开始注射。